En el marco de la presentación del Pikmin 3, Shigeru Miyamoto, reveló que Mario Bros inicialmente era una alegoría a la Comunidad LGBT (Lésbico, Gay, Bisexual, Trans) y que Luigi y Mario no eran hermanos, sino amantes homosexuales.
Durante una conferencia de prensa, se le preguntó al creador de Mario Bros su opinión sobre los estudios que revelan que los niños de la actualidad perciben a Mario y Luigi como pareja gay, él respondió:
"Esa fue la intención original del juego. Era un juego cargado de signos de la cultura gay, Luigi y Mario eran una pareja gay tratando de enfrentar los retos de una sociedad que los rechaza, más adelante al introducirlo al mercado internacional se adecuaron algunos contenidos e intenciones para llegar a un público occidental, pero si observan con cuidado, muchos de los conceptos originales están presentes", afirmó.
James Gardner, investigador de la Universidad de Wisconsin, ya había realizado algunas conjeturas al respecto, asegurando que el juego de video tenía claras referencias de la cultura LGBT: la princesa, no es real, es una alegoría a la femineidad tradicional representada como un símil de la homosexualidad y en el juego los amantes se confrontan a la búsqueda constante, castillo tras castillo, para al final aprender que la identidad gay va más allá de una simulación de lo femenino.
Por otro lado, están los "elementos fálicos", como lo son las astas por las que Mario y Luigi deben deslizarse para completar cada nivel, o los hongos en forma de glande.
James Paul Gee, otro investigador, ha hecho reflexiones en torno a la plomería, profesión que desempeñan ambos personajes, al dedicarse a la revisión de tuberías se hace una clara referencia al sexo homosexual. Además afirma que el principal enemigo de Mario y Luigi, Koopa, representa la masculinidad exagerada, el machismo y la intolerancia, es por ello que el dúo de plomeros debe montarse en el para derrotarlo.
